前言
壳聚糖(Chitosan)化学名为B一(1，4)一2一 氨基一2一脱氧一D一葡聚糖，是由广泛存在于 虾、蟹壳中的天然生物高聚物甲壳素经氢氧化钠 脱乙酰化处理获得的产物，脱乙酰度在70％以 上，不溶解于水、甲醇、丙酮及氯仿，只溶解于稀乙 酸等酸性溶液中而形成透明状的黏液．研究发现 壳聚糖的性质随相对分子质量的不同有着较大的 差异，低相对分子质量的壳聚糖具有良好的生理 活性，如提高机体的免疫力、活化人体的淋巴细胞、 抗癌防瘤等⋯．用生物酶法制备低聚壳聚糖，酶降 解过程工艺简单，条件温和，不产生环境污染，而且 可控制聚合度，优于其他方法，具有广阔的发展前 景口’61．本文旨在采用非专一性混合酶浓缩甜酒曲
降解壳聚糖，对温度、底物浓度、pH值和酶解时间 等因素对降解壳聚糖的影响进行了探讨．
1 材料与方法
1．1 实验材料
壳聚糖：青岛海生生物有限公司；浓缩甜酒曲
收稿日期：2009—014．2l 基金项目：江西省自然科学基金(0620071)；江西省教育厅科技项 目(赣教技字[2007]168号)；航空高校基金(EA200502138) 作者衙介：李向东(1963一)，男，河南沈丘人，副教授，研究方向为 物理化学．
•通讯作者
(非专一性混合酶)：上海恩太酒药食品有限公
司；乙酸(cH，COOH)：分析纯，上海振兴化工二 厂；其余试剂均为分析纯．
乌氏粘度计：毛细管长度为140 mm，内径
0．5 mm±0．05 mm，a—b之间球容积为3．35 mL
±0．5 mL，在25℃用蒸馏水测定流出时间应在
120—180 s之间；恒温水浴装置：‘p30 cm×40 cm 玻璃缸一个，配置一个电动搅拌器和一支贝克曼 温度计，将水浴温度维持在(25±O．05)℃之内； 秒表：分度为0．01 s；PHs一25型酸度计；HsG一Ⅱ B一4型电热恒温水浴锅：上海仪表(集团)供销 公司；10l一2型恒温鼓风干燥箱，上海跃进医疗 仪器厂；ABl04一N型电子天平：梅特勒一托利多
“仪器公司．
1．2 实验方法
1．2．1 壳聚糖脱乙酰度和相对分子质量的测定
1．2．1．1脱乙酰度的测定 根据文献[1]进行测定．
1．2．1．2相对分子质量的测定
根据文献[1]进行测定，黏均相对分子质量 根据文献[7]计算．
1．2．2浓缩甜酒曲对壳聚糖降解
1．2．2．1温度对降解反应的影响 在一定pH值0．2 mol／L的HAc—NaAc缓
冲溶液中，在20～80℃的温度范围内，将l％的
壳聚糖与一定浓度的浓缩甜酒曲溶液作用，测定 作用后各溶液的黏度．
1．2．2．2 pH值对降解反应的影响 在一定温度下，用酸度计校正，在不同pH值
0．2 moL／L的HAC—NaAC缓冲溶液中(因为壳聚
糖在pH>6．5时，不溶于水溶液，实验时，选择 pH范围在1—6．0)，1％壳聚糖与浓缩甜酒曲作 用1．5 h，测定作用后各溶液的黏度．
1．2．2．3 底物浓度对降解反应的影响 保持酶量不变，改变壳聚糖的用量，其他条件
相同，将0．2 m01／L壳聚糖缓冲溶液与浓缩甜酒
曲溶液反应一定时间后，测定作用后各溶液的黏
度．
1．2．2．4酶解时间对降解反应的影响
1．922 7．
保持酶量，壳聚糖用量不变，在～定的pH值 和温度下，将O．2 mol／L壳聚糖缓冲溶液与浓缩 甜酒曲溶液分别作用不同的时间后，测定各溶液 的黏度．
1．2．3最佳条件下浓缩甜酒曲降解壳聚糖 在最佳的温度、pH值、底物浓度、时间等条件
下，将O．2 mol／L壳聚糖缓冲溶液与浓缩甜酒曲 溶液反应，得到低聚壳聚糖产物，测定其相对分子 质量．
2 结果与讨论
2．1脱乙酰度和相对分子质量的测定
2．1．1 脱乙酰度的测定
壳聚糖重G=0．209 6 g，置于105℃烘干至 恒重，测定水分llJ=4．3％．用NaOH标准溶液滴 定壳聚糖溶液，3次耗用量分别为9．98 mL、9．96 mL、9．98 mL；根据公式氨基含量=[(C。y。一 C：K)O．016]／G(100一留)×100％和脱乙酰度=
[(一NH：)％／9．94％]×100％，计算壳聚糖样品
的脱乙酰度约为90．35％．
2．1．2相对分子质量的测定
根据壳聚糖的脱乙酰90．35％，查找资料得K
=8．764×10。／(mL•g“)、a=0．87；测溶剂的 黏度及壳聚糖样品溶液的黏度，如表l所示，并用 表1中的数据作黏度田叩一C图(图1)．
表1 壳聚糖样品溶液黏度
特性黏度【田] R／8 L／8 砭／s L／s L／s
图1 测定特性黏度时的卵8p—C图
图1中直线的截距[田]=0．96×100，根据
[11]=刎。，代入K和口值，求得黏均相对分子质
量肘¨一4．3973×104．
2．2 浓缩甜酒曲对壳聚糖降解作用的研究
2．2．1 温度对酶降解反应的影响
分别在25℃、30℃、35℃、40℃、50℃、
60℃下，将pH4．0、浓度为O．2 mol／L的壳聚糖 HAC—NaAC缓冲溶液与浓缩甜酒曲溶液反应2 h，测定溶液黏度．测不同温度条件下壳聚糖缓冲 溶液与酶溶液作用后通过乌氏黏度计的时间，计 算各壳聚糖样品溶液的黏度，根据不同温度得到 的数据作’7sp—C图，直线截距即为壳聚糖样品 溶液的特性黏度．根据反应温度对特性黏度作图，
得到图2．由图2可知，在较低温度时，随着温度
上升，酶活性逐渐增高，溶液黏度下降，达到50℃ 时，溶液黏度最小，而后又缓慢上升．因此，以壳聚 糖为底物的浓缩甜酒曲催化反应的最适宜温度为
50℃．
图2温度对酶降解反应的影响
2．2．2 pH值对酶降解反应的影响
稀释后溶液的浓度分别为：C：=2／3×c。，C，
=1／2×C。，c．=1／3×C。；对应于各浓度的相对黏 度[矿]为：矿。=L／％=3．932 4，’7r：=咒／死=(责任编辑：南粤论文中心)转贴于南粤论文中心: http://www.nylw.net(南粤论文中心__代写代发论文_毕业论文带写_广州职称论文代发_广州论文网）
