0 前言
猕猴桃属于猕猴桃科(Actinidiacease)猕猴桃 属(Actinidia)的一种落叶性藤本果树．它营养丰 富、食用价值高，尤其是具有一定的医疗保健效 果，因而备受人们重视⋯．现在对其研究非常广 泛，医学研究证实，猕猴桃汁具有阻断致癌性亚硝 基化合物合成的作用；有防癌功能¨一；猕猴桃素 (Actinidin)是从猕猴桃果实中提纯出来的一种类 似木瓜蛋白酶的水解酶，可以嫩化肉类¨1，防止 果冻凝固，药理证明具有抗肿消炎功能；猕猴桃中 还含有大量抗衰老物质超氧化物歧化酶(SOD)， 可增强人体免疫功能，增高人血清SOD含量，减 少脂质过氧化物MDA的含量¨1；由于果糖含量 较低，猕猴桃还是糖尿病患者最适宜食用的水果． 国内外关于猕猴桃蛋白质的研究，过去虽然做了 一些工作但一般都是对含量的分析，以及蛋白酶 的简易提纯和性质研究．对猕猴桃蛋白质的类型 还尚未见报道．因此有必要对猕猴桃蛋白质的类 型进行鉴定，为它的应用提供理论依据，并最终推 动整个猕猴桃产业的发展．
本研究采用乙醇做为提取剂，硫酸铵等电点
沉淀、经过透析浓缩得到的样品过凝胶色谱柱进
收稿日期：2009-04-22 基金项目：淮安市科技项目(HAG8058) 作者简介：王岸娜(1972一)，女，山西洪洞人。博士，副教授，研究
方向为大分子在食品中的应用．
行分离。运用考玛斯亮蓝和苯酚硫酸法测定糖与
蛋白质的比，并对所得的样品进行红外分析，鉴定
所得蛋白质的类型．
1 材料与方法
1．1材料与仪器 “秦岭”中华猕猴桃：郑州果品批发市场采
购，果实新鲜、饱满，大小相对一致，剔除畸形果、
损伤果和软果；8000—14000透析袋购于北京索莱 宝科技有限公司；Sephrose cL“B购于amersham
公司．
RE2000旋转蒸发器：上海亚荣生化仪器厂； SHB--B95型循环水式多用真空泵：河南巩义市英 峪予华仪器厂；TU—1800pc紫外可见分光光度
计：北京普析通用仪器有限公司；层析柱：上海锦
华层析设备厂；HL一2B数显衡流泵：上海沪西分 析仪器有限公司；Bsz—100自动部分收集器：上 海沪西仪器厂有限公司；pHS一25数显pH计：上 海精密科学仪器有限公司；Delta 326电导率仪：梅 特勒一托利多仪器有限公司；IR--Prestige21型傅
立叶变换红外光谱仪：岛津分析仪器厂制作；
835—50氨基酸自动分析仪：日本Hitachi公司．
1．2 实验方法
1．2．1 猕猴桃蛋白质的提取与定量
将猕猴桃表面擦净，去皮，去籽，榨汁；取果汁
10 mL于三角瓶中，以l：6的料液比加入20％的 乙醇水溶液，在25℃下水浴震荡40 rain．5 000
r／rain离心10 rain，取上清液旋转蒸发除去溶剂，
即得猕猴桃蛋白质粗体液，转移到烧杯中，置于4
℃冰箱保存；从上述总蛋白提取液中取5 mL，考
玛斯亮蓝法”’测得总蛋白质含量．
1．2．2猕猴桃蛋白质的沉淀 采用硫酸铵等电点法沉淀粗体液中的蛋白
质．取100 mL粗体液于7个烧杯中，加入
(NH。)：SO。使饱和度达到20％、30％、40％、
50％、60％、70％、80％，所加硫酸铵需用研钵磨成 细粉状，缓慢加入，磁力搅拌器搅拌使硫酸铵完全 溶解；取100 mL粗体液于7个烧杯中，将溶液的 pH值调节至等电点为2、3、4、5、6、7、8．所有的烧 杯4℃静置过夜，5 000 r／rain离心lO min，测定 上清液中蛋白质含量，计算沉淀率．
1．2．3猕猴桃蛋白质的透析浓缩
沉淀样品装入经过处理的透析袋，留三分之 一至一半的空间，两端用夹子夹紧，于去离子水中 透析．6—8 h更换一次去离子水，并使用磁力搅 拌器搅拌以加快透析速度．用电导率仪测定溶液 的导电率，直到导电率恒定为止．
将透析完毕的透析袋用聚乙二醇(PEG6000) 包埋．浓缩至原来体积的1／2后取出，进行冷冻干 燥，得到固体粉末．
1．2．4猕猴桃蛋白质的分离旧1
上述粉末100 mg复溶于10 mL pH7．5的磷 酸缓冲液中，离心取上清液3 mL上1．6 cm x 100 cm的SepharoseCL--6B柱，磷酸缓冲液(pH=
7．5)为平衡液和洗脱液，流速为15 mL／h，每40
rain收集一管，每管收集10 mL，紫外220 llm跟踪 检测蛋白质的含量，收集洗脱峰，进行透析，浓缩， 然后冷冻干燥得到样品．考玛斯亮蓝测得样品中 蛋白质的含量，苯酚硫酸法测得糖的含量。得出蛋 白质与糖含量比．
1．2．5猕猴桃蛋白质的鉴定
用苯酚一硫酸法"1对凝胶过滤的每一收集管 进行糖量的测定，绘制各收集管的糖含量趋势峰。 比较收集管中蛋白280 nm的吸收峰与糖含量的 高低趋势峰的关系，若二者呈现一致重叠的趋势。 可初步判断糖蛋白的存在"1．为了进一步准确鉴 定糖蛋白，进行红外光谱的分析．
1．2．6红外光谱鉴定蛋白质的类型
取收集得到的两个冻干样品5 mg左右，与
300 mg经干燥的溴化钾粉末在玛瑙研钵中轻轻 研磨均匀，越细越好，在红外灯下操作，以免溴化 钾吸收空气中的湿气．混合好的粉末置于有孔滤
纸中，经压片机压成薄片，随即上机器测定．
1．2．7糖肽键，}生质的分析‘91
分别取猕猴桃蛋白质的两个样品20 mg溶于
5 mL 0．1 mol／LNaOH溶液中，30℃反应20 h，测
定碱处理前后240 nm处氨基酸含量的变化．
2 结果与分析
2．1猕猴桃蛋白质的提取与定量
蛋白质浓度，(Ⅳg•mL-‘)
图l 牛血清蛋白质标准曲线 用考玛斯亮蓝法来对总蛋白提取液定量，考
玛斯亮蓝法是利用蛋白质一染料结合的原理，定
量地测定微量蛋白质浓度的快速、灵敏的方法．本 实验选取Sigma公司纯牛血清蛋白(BSA)制作标 准曲线，用722可见分光光度计测OD值，在本实 验的提取条件下测得蛋白质的提取量为505．470
¨s／mL，每100 mL果汁中蛋白质的提取量为
50．55 mg．
2．2总蛋白质提取液的沉淀(责任编辑：南粤论文中心)转贴于南粤论文中心: http://www.nylw.net(南粤论文中心__代写代发论文_毕业论文带写_广州职称论文代发_广州论文网）
