Diabetic cardiomyopathy and dilated cardiomyopathy early myocardial mitochondrial
　　permeability transition pore opening Comparative study
　　【Abstract】Objective：Observation of early diabetic cardiomyopathy and dilated cardiomyopathy myocardial mitochondrial permeability transition pore similarities and differences between the degree of openness。Methods：30 Wistar rats were randomly divided into control group, diabetes, expanding heart disease group ，Diabetic cardiomyopathy and dilated cardiomyopathy early modeling success, Detected mitochondrial PTP opening and membrane potential and Ca2 + transport。Results：MPTP opening detect the highest absorbance value of the diabetic group compared with the control group and extend heart disease group were significantly different, expanding heart disease group and control group, there is a significant difference ；Detection of Ca2 + transport absorbance and Membrane potential, Rh123 fluorescence diabetic group and control group, there is a significant difference, expanding heart disease group and control group, there is a significant difference。Conclusion Diabetic cardiomyopathy and dilated cardiomyopathy early mitochondrial MPTP showed a high open state, the former was significantly higher than the latter。Diabetic cardiomyopathy and dilated cardiomyopathy early in the mitochondrial energy metabolism that is a common pathophysiologic mechanism。
　　【Key words】Diabetic cardiomyopathy; dilated cardiomyopathy; MPTP
　　
　　线粒体膜通透转运孔(mitochon-drialpermeability transition pore, MPTP)是线粒体内外信息交流的中心枢纽,其开放状态决定着线粒体功能的发挥。本研究旨在观察MPTP在糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DC)及扩张性心肌病实验大鼠中(dilated cardiomyopathy,DCM)开放高低的差异，以探讨MPTP在两者病理生理机制中作用的异同。
　　1 材料和方法
　　1.1材料
　　1.1.1动物清洁级雄性Wistar大鼠40只,体重180~200g,由华中科技大学实验动物中心提供(合格证001号,环境设施合格证028号)。随机分为对照组、糖尿病心肌病组（糖尿病组）、扩张性心肌病组（扩心病组），每组10只。
　　1.1.2试剂链脲佐菌素(Sigma公司,批号S01301178);吠喃哇酮(成都前江制药厂，国药准字H51020009)，梭甲基纤维素钠(Sigma公司)。HEPES，牛血清蛋白，罗丹明123（Rh123），偶氮砷（钙离子指示剂AⅢ，Sigma公司）；Bradford试剂盒（上海朝瑞生物有限公司）；其他为国产分析纯。
　　2 方法
　　2.1糖尿病心肌病大鼠模型的建立大鼠喂养1周后,随机取大鼠10只,参考文献方法[1]建立糖尿病心肌病大鼠模型。
　　2.2 扩张性心肌病大鼠模型的建立大鼠喂养1周后,随机取大鼠10只,参考文献方法[2]建立扩张性心肌病大鼠模型。
　　2.3 线粒体的提取
　　所有大鼠造模成功后，迅速取出心肌，剪碎置于10倍线粒体分离介质中［225mmol/L甘露醇、75mmol/L蔗糖和20mmol/L Hepes，0.5mmol/L EGTA和1%牛血清白蛋白（pH7.2）］，冰水浴中匀浆。匀浆液于4℃离心10分钟，除去细胞碎片及细胞核，取上清离心10分钟，所得沉淀即为线粒体。线粒体蛋白含量用Bradford检测试剂盒检测，得到的线粒体按12mg/ml蛋白浓度用PTP测试介质悬浮并置冰上保存。使用前用PTP测试介质稀释至0.3mg/ml蛋白浓度。
　　2.4 PTP开放检测：参照文献[3]的方法。
　　2.5 线粒体膜电位检测：参照文献[3]的方法。
　　2. 6 线粒体Ca2+转运检测：参照文献[3]的方法。
　　2.7 统计学处理
　　所得数据以SPSS 13. 0统计软件进行t检验,以P<0. 05为差异有统计学意义。
　　3 结果
　　由表1可见，MPTP开放检测吸光值糖尿病组最高，与对照组及扩心病组比较均有显著性差异（P<0.05），扩心病组与对照组比较，有显著性差异（P<0.05）；Ca2+转运检测吸光值及膜电位Rh123荧光值糖尿病组与对照组比较，有显著性差异（P<0.05），与扩心病组比较，无显著性差异（P>0.05），扩心病组与对照组比较，有显著性差异（P<0.05）。
表1 两组大鼠线粒体MPTP开放、Ca2+转运
　　及膜电位RH123测定值比较
　　组别 例数 线粒体MPTP
　　开放 Ca2+转运 膜电位RH123
　　对照组 10 0.051±0.019 0.050±0.014 0.044±0.026
　　糖尿病组 10 0.096±0.022 0.066±0.015 0.054±0.024
　　扩心病组 10 0.064±0.023 0.055±0.016 0.049±0.021
　　4 讨论
　　线粒体通透性转变孔道位于线粒体内外膜结合处，此蛋白孔道的开放能引起膜电位的下降或消失、对细胞的凋亡起重要的调控作用。而Ca2+转运是线粒体调控胞内生理和病理过程中的重要事件之一，特别是在缺氧应激过程中起重要的作用。在受到特定刺激时,MPTP高水平开放,造成离子和一些活性物质(如细胞色素C)释放,线粒体内外电荷分布紊乱,线粒体膜除极,最后膜电位降低或丧失。因此,可以通过检测膜电位及Ca2+转运来观察MPTP的变化。
　　本研究结果显示，糖尿病组线粒体MPTP呈高水平开放，与正常对照组有显著性差异，高通透性的线粒体MPTP的开放使得线粒体释放细胞色素C及细胞凋亡诱导因子等，Waczulikova等[4]认为高糖诱导糖尿病心肌病MPTP开放的增加，通过攻击线粒体及增加线粒体膜的通透性,促进细胞色素C释放入细胞质中,与凋亡蛋白酶激活因子1(apoptosis protease activating factor-1, Apaf-1)结合,并激活Caspase家族蛋白酶从而介导细胞凋亡，而凋亡的持续存在是心肌纤维化不断发展的推动力，致心肌结构和功能改变，从而引起糖尿病左室舒张和/或收缩功能障碍。结果中，糖尿病组膜电位明显降低，与对照组存在显著性差异。糖尿病Ca2+转运较对照组高，也有显著性差异。通过测定这两个指标，进一步证实了糖尿病组大鼠心肌MPTP开放的增加，可能是糖尿病心肌病发病机制之一。 (责任编辑：南粤论文中心)转贴于南粤论文中心: http://www.nylw.net(南粤论文中心__代写代发论文_毕业论文带写_广州职称论文代发_广州论文网）