环氧化酶是花生四烯酸转化为前列腺素的限速酶,有COX-1和COX-2两种同工酶。COX-2可作为分化和生长因子,发挥类似免疫抑制剂及血管合成药物样作用,促进肿瘤的增生发展,侵袭和转移。一氧化氮(nitrieo xide,NO)是人体内的一种具有生物活性的分子,iNOS的过量表达能促进胃粘膜细胞凋亡、腺上皮细胞凋亡,导致腺体的萎缩,酸和胃蛋白酶分泌减少,则有利于亚硝胺类致癌物形成和重要胃癌前病变的发生和发展。2009年6月～2010年8月笔者检测COX-2、iNOS在胃癌组织中的表达情况,初步探讨其在胃癌发展中的作用机制以及临床意义。
　　
　　1　材料与方法
　　
　　1.1　材料组织标本来源于潍坊妇幼保健院普外科根治性手术切除的64例胃癌原发灶,有完整的临床资料,男50例,女14例。正常胃粘膜组织20例,均经病理证实。全部患者术前均未接受化疗和放疗。64例胃癌标本根据组织学分级分为高中分化腺癌组25例,低分化腺癌组39例,其中包括低分化腺癌18例,印戒细胞癌11例,粘液腺癌10例;根据浸润深度分为未浸润浆膜层组24例,浸润浆膜层组40例;根据有无淋巴结转移分为无淋巴结转移组20例,有淋巴结转移组44例。
　　1.2　试剂以及方法COX-2、iNOS克隆抗体购于博士德生物技术有限公司,用免疫组化法检测。
　　1.3　阳性结果判定标准阳性:有棕黄色颗粒且染色强度高于背景的非特异性着色为阳性细胞。阴性:细胞浆无染色或与阴性对照一致。在10 x40倍显微镜视野下将玻片分为5个区,每个区中连续观察100个细胞,平均个数作为计量值。根据相关文献,以阳性细胞数所占比例(5个高倍视野)分为:(-)为着色细胞<10%;(+)为细胞着色数量10%～25%:(++)细胞着色数量26%～50%:(+++)为细胞着色数目>50%。
　　1.4　统计学处理应用SPSS10.0软件包对资料进行统计学处理,定性资料进行卡方检验,并行Spearman等级相关进行相关性分析,检验水准为a=0.05。
　　
　　2　结果
　　
　　正常胃粘膜组织可见COX-2阳性表达,胃癌组和淋巴结转移组的COX-2的表达程度明显强于邻近正常胃粘膜组(P<0.01)。并且分化较差的和穿透浆膜层的分别强于分化较好的和未穿透浆膜层的。淋巴结转移性胃癌组织中阳性表达率高达88.6%,表现为癌细胞呈非均质性染色。细胞质着色浅,细胞核不着色。依胃癌生长方式、分化程度、浸润深度、淋巴结转移等临床病理因素的不同,表达强度存在明显差别。正常胃粘膜组织可见iNOS阳性表达,胃癌组和淋巴结转移组的iNOS的表达程度明显强于邻近正常胃粘膜组(P<0.01)。并且分化较差的和穿透浆膜层的分别强于分化较好的和未穿透浆膜层的。依胃癌生长方式、分化程度、浸润深度、淋巴结转移等临床病理因素的不同,表达强度存在明显差别。COX-2的阳性表达与COX-2的阳性表达成正相关,有统计学意义(P<0.05)。COX-2以及COX-2的阳性表达与胃癌的浸润深度、分化程度、淋巴结转移密切相关,与患者的年龄、性别、肿瘤的大小无关。行卡方检验及Spearman等级相关性分析发现,胃癌组织中iNOS和COX-2的表达有相关性,相关系数r=0.388,具有统计学意义(P<0.01)。见表1,2。
　　
　　3　讨论
　　
　　胃癌的发病机制非常复杂,多种致癌因素在不同的阶段可作用于不同的基因,导致基因结构以及表达水平的改变。COX-2增高可能为胃肠道肿瘤形成的早期事件。Guo等研究了31例幽门螺杆菌(Hp)阳性胃癌患者,其中26例出现COX-2过表达,18例血清抗细胞毒素相关蛋白A(cagA)阳性患者的表达明显高于13例cagA阴性患者,表明HpcagA阳性菌株与COX-2关系密切。Zarrili等的研究表明感染可上调COX-2的表达,认为在形成胃癌的多阶段过程中,COX-2的高表达可能有重要作用,COX-2的特异性抑制剂有可能用于Hp根除失败者或胃癌发生的高危人群。Sung等研究表明,COX-2在胃癌中的表达明显高于癌前病变组。COX-2过表达可增加前列腺素E2(PGE2)的合成,而PGE2诱导细胞增殖并刺激Bcl-2蛋白表达,后者可抑制细胞凋亡,使细胞增殖和凋亡失衡,从而促进肿瘤的发生。Akhtar等研究表明COX-2启动子的去甲基化导致COX-2的过表达,并且促进Hp相关性胃癌形成。Warn—bura等认为Hp诱导COX-2的异常表达导致胃上皮细胞动力学异常,在胃肿瘤形成中起重要作用。本研究结果显示,COX-2在胃癌中的表达阳性率明显胜过正常胃粘膜组,且与淋巴结转移,病程进展显著相关。因此,临床上使用选择性的COX一2抑制剂用于肿瘤治疗的有效性值得进一步研究。
　　在正常生理情况下iNOS一般不表达。当机体受到微生物等的侵犯时,产生非特异性免疫,胃肠道粘膜上皮细胞、固有层中的各种炎症细胞、血管内皮细胞被内毒素或T细胞激活,iNOS表达增强,其产物NO增多。如NO的免疫防御功能过强,大量的NO与超氧阴离子作用,产生具有细胞毒性的分子,造成自身正常组织损伤。Elizabeth等的研究亦证实在胃癌中,iNOS、过氧化亚硝酸盐、硝基酪氨酸表达增高,Sakaguchi等的研究表明:iNOS、过氧化亚硝酸盐及巨噬细胞免疫活性(Hp能诱导巨噬细胞iNOS表达)在消化性溃疡中明显增强,且随溃疡愈合、iNOS活性显著降低。本研究也显示,iNOS在胃癌的发生发展中起了重要的作用。
　　根据Correa提出的胃癌多步骤发生发展模式,胃癌始于慢性活动性胃炎、胃萎缩、肠化生、异型增生,最终形成肿瘤,但其机制还待探讨。本实验发现iNOS与COX-2的表达成正相关,可能是NO促进了COX-2的表达,NO通过产生的自由基以及抑制COX-2的失活,延长了COX-2的半衰期,另一种可能是NO与超氧化物反应的产物过氧化亚硝基可引起膜脂质过氧化,可使细胞释放花生四烯酸,促进了COX-2的产生。故两者在胃癌发生发展中起到了协同作用。