3讨论 MTX与DNA甲基化有关。MTX作为叶酸盐拮抗剂，和二氢叶酸竞争性的与细胞内二氢叶酸还原酶结合，使二氢叶酸不能被还原成四氢叶酸。由于 四氢叶酸缺乏，阻碍N5-甲基四氢叶酸的合成，S一腺苷同型半胱氨酸和高半胱氨酸蓄积。S一腺苷同型半胱氨酸竞争性抑制S一腺苷甲硫氨酸，而S一腺苷甲硫 氨酸是“甲基”的直接供体，使得DNA甲基化合成 受到抑制【7。8】。所以MTX可引起细胞内DNA甲基化水平降低。
MTX广泛用于临床各种肿瘤的治疗，但患者细 胞容易产生获得性耐药。肿瘤细胞对MTX的获得 性耐药是成功治疗肿瘤的最大障碍。我们在体外通 过浓度递增结合低剂量持续诱导的方法诱导非小细 胞肺癌A549细胞发生MTX获得性耐药，据Snow et al一1耐药标准(耐药指数RI小于5是低度耐药，5～15是中度耐药，大于15是高度耐药)，可以看出15、30、40 i_LmoL／L MTX诱导耐药非小细胞肺癌A549细 胞株对MTX均为中度耐药。毛细管电泳法检测细胞内整体DNA甲基化，实 验结果发现：A549细胞和A549／MTX细胞整体 DNA甲基化水平差异存在有统计学意义。非小细 胞肺癌A549细胞发生MTX耐药时，其甲基化水平 明显降低，且随着MTX耐药浓度增加，耐药细胞株 甲基化程度依次降低，推测这可能与细胞内叶酸水 平降低有关。叶酸与MTX类似，呈竞争性抑制，细 胞内叶酸是DNA合成、复制和甲基化的辅助因子， 也是正常细胞代谢所必须的。肿瘤细胞中叶酸与 DNA甲基化密切相关，Johanning et al¨0‘川报道叶 酸缺乏时整体甲基化水平降低。细胞发生MTX耐 药时，细胞内二氢叶酸还原酶活性增加，同时细胞摄 取叶酸的能力减弱，使得细胞内叶酸水平明显降低， 耐药细胞株内DNA甲基化受到抑制。鉴于细胞内整体DNA甲基化水平随着MTX耐 药浓度的增加逐渐降低的结果，我们推测MTX的耐 药机制可能与DNA甲基化相关。在MTX用药过程 中给予可增加细胞内DNA甲基化水平的甜菜碱、甲 硫氨酸、S．腺苷甲硫氨酸等辅助治疗，可能增强 MTX杀伤肿瘤细胞能力，同时抑制MTX获得性耐 药的发生。结合Winter—Vann et al【31报道的Icmt(甲 基转移酶的一种，催化Ras甲基化)缺陷型的细胞 以及豆蔻酰化的Ras对MTX耐药，表明MTX治疗 肿瘤可能通过降低Ras基因羧基甲基化水平，靶向 抑制Ras信号传导杀伤肿瘤细胞；MTX获得性耐药可能与Ras基因甲基化水平有关。Ras基因只是甲基化转移酶作用的一种底物。这为我们通过使用诸 如Ras之类的能与甲基化转移酶发生作用的药物抑 制MTX耐药提供了可能。MTX耐药细胞整体DNA 甲基化水平的检测进一步阐述了MTX的耐药机制， 为抑制MTX获得性耐药的发生提供参考。
参考文献
[1]P∞etta J C。Wall A，Pui C H，et a1．Methotrexate intracellular dis- position in acute lymphoblastic leukemia：A mathematical model of Y•glutamyl hydmlase activity【J]．Clin Cancer Res，2002，8(7)：
2423—9．
[2] 王聪慧．陆友金．非小细胞肺癌中TMSl基因甲基化检测[J]． 安徽医科大学学报，2008，43(1)：46—9．
[3]Winter-Vann A M，Kalnen B A，Bergo M O，et a1．Targeting Ras signaling thmngh inhibition of carboxyl methylation：an unexpected property of methotrexate[J]．Proc Nad Acad Sci USA，2003，100 (11)：6529—34．
[4] Kishi T，Tanal【a Y，Ueda K．Evidence for hypomethylation in two children with acute lymphoblastic leukemia and leukoencephalopa- thy[J]．Cancer，2000，89(4)：925—31．
[5]Stach D，Schmitz 0 J，Stilgenbauer s，et a1．Capillary electrophoret- ie analysis of ge∞rIlic DNA methylation levels[J]．Nucleic Acids Res，2003，31(2)：E2．
[6]Fraga M F，Uriol E，Borja Diego L，et a1．High—performance capil- tary electrophoretic method for the quantification of5-methyl 2'-de- oxycytidine in genomic DNA：Application to plant，animal and hu-
man cancertissues[J]．Electrophoresis，2002，23(11)：1677—81．
[7]Philips M R．Methotrexate and Ras methylation：A new trick for all
old drug?[J]．Sci STKE，2004，2004(225)：pel3．
[8]Chiang P K。Gordon R K，Tal J，et a1．S-Adenesylmethionine and methylation[J]．FASEB J，1996，10(4)：47l一80．
[9]Snow K，Judd W．Charaeterisation of adriamycin—and amsaerine•re-
sistant human leukaemie T cell lines[J]．Br J Cancer。1991，63 (1)：17-28．
[10]Johanning G L，Heimburger D c，Piyathilake C J．DNA methylation
and diet in cancer[J]．J Nutr，2002，132(12)：3814S一8s．
[11]Piyathilake C J，BellW C，Jones J，etal．Pattern ofnonspecific(or
global)DNA methylation in oral carcinogenesis[J]．Head Neck，
2005，27(12)：106l一7．
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